Extraction et étude de l’activité enzymatique de la polyphénol oxydase (EC 1.14.18.1) du champignon de Paris Agaricus bisporus
Des informations générales:
Le niveau |
Master |
Titre |
Extraction et étude de l’activité enzymatique de la polyphénol oxydase (EC 1.14.18.1) du champignon de Paris Agaricus bisporus |
SPECIALITE |
Microbiologie fondamentale |
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Sommaire:
Introduction
Chapitre I: Rappels théoriques
I- Le champignon de Paris Agaricus bisporus.
I.1. Généralités
I.2. Historique.
I.3. Définition
1.4. Morphologie.
I.5. Classification
I.6. Culture
I.7. Contexte écologique
I.8. Cycle de reproduction.
I.9. Valeur nutritionnelle
I.10.Pathologies et parasites du champignon de couche
II- La polyphenol oxydase
II.1.Historique
II.2. Définition
II. 3.Classification et nomenclature
II.4.Réactivité des PPOs
II.4.1. Activité monophénolase (EC 1.14.18.1)
II.4.2. Activité diphénolase (EC 1.10.3.1)
II.5. Caractéristiques structurales des PPOs.
II.5.1. Architecture moléculaire
II.5.2. Site actif
II.5.3. Sources, localisation et distribution.
II.6. Rôles physiologiques
II.7. Mécanismes réactionnels
II.8. Etude de l’activité PPO
II.8.1. Influence du pH sur l’activité de la PPO
II.8.2. Influence de la température sur l’activité de la PPO.
II.8.3. Spécificité du substrat
II.9. Applications de la PPO
II. 10. Brunissement enzymatique et non enzymatique.
II.10.1. Les réactions de brunissement enzymatique.
II. 10.2. Le brunissement non enzymatique
Chapitre II: Matériel et méthodes
I- Principaux réactifs utilisés
I.1. Produits chimiques
I.2. Matériel biologique.
II-Extraction et purification de la PPO d’Agaricus bisporus.
II.1. Préparation de l’extrait brut
II.2. Fractionnement par l’acétone 99,5%
II.3. Précipitation par le sulfate d’ammonium à 60% de saturation
III-Dosage des protéines par la méthode de Biuret
III.1. Principe
III.2. Préparation de la gamme d’étalonnage
III.3. Calcule de la concentration en protéine de l’extrait enzymatique de la PPO
IV- Détermination de l’activité enzymatique de la PPO
IV.1. Détermination de l’activité enzymatique volumique
IV.2. Détermination de l’activité enzymatique spécifique
Chapitre III: Résultats et discussion
I- Extraction et purification de la PPO du champignon de Paris. II-Mesure des activités volumiques et spécifiques de l’enzyme.
Chapitre IV: Conclusion et perspectives
I- Préparation de la solution tampon Phosphate de sodium 0,1M- pH 7
II- Préparation de la solution L-tyrosine à 2.5mM Tampon
III- Préparation du réactif de Biuret.
Chapitre I: Rappels théoriques
I- Le champignon de Paris Agaricus bisporus.
I.1. Généralités
I.2. Historique.
I.3. Définition
1.4. Morphologie.
I.5. Classification
I.6. Culture
I.7. Contexte écologique
I.8. Cycle de reproduction.
I.9. Valeur nutritionnelle
I.10.Pathologies et parasites du champignon de couche
II- La polyphenol oxydase
II.1.Historique
II.2. Définition
II. 3.Classification et nomenclature
II.4.Réactivité des PPOs
II.4.1. Activité monophénolase (EC 1.14.18.1)
II.4.2. Activité diphénolase (EC 1.10.3.1)
II.5. Caractéristiques structurales des PPOs.
II.5.1. Architecture moléculaire
II.5.2. Site actif
II.5.3. Sources, localisation et distribution.
II.6. Rôles physiologiques
II.7. Mécanismes réactionnels
II.8. Etude de l’activité PPO
II.8.1. Influence du pH sur l’activité de la PPO
II.8.2. Influence de la température sur l’activité de la PPO.
II.8.3. Spécificité du substrat
II.9. Applications de la PPO
II. 10. Brunissement enzymatique et non enzymatique.
II.10.1. Les réactions de brunissement enzymatique.
II. 10.2. Le brunissement non enzymatique
Chapitre II: Matériel et méthodes
I- Principaux réactifs utilisés
I.1. Produits chimiques
I.2. Matériel biologique.
II-Extraction et purification de la PPO d’Agaricus bisporus.
II.1. Préparation de l’extrait brut
II.2. Fractionnement par l’acétone 99,5%
II.3. Précipitation par le sulfate d’ammonium à 60% de saturation
III-Dosage des protéines par la méthode de Biuret
III.1. Principe
III.2. Préparation de la gamme d’étalonnage
III.3. Calcule de la concentration en protéine de l’extrait enzymatique de la PPO
IV- Détermination de l’activité enzymatique de la PPO
IV.1. Détermination de l’activité enzymatique volumique
IV.2. Détermination de l’activité enzymatique spécifique
Chapitre III: Résultats et discussion
I- Extraction et purification de la PPO du champignon de Paris. II-Mesure des activités volumiques et spécifiques de l’enzyme.
Chapitre IV: Conclusion et perspectives
I- Préparation de la solution tampon Phosphate de sodium 0,1M- pH 7
II- Préparation de la solution L-tyrosine à 2.5mM Tampon
III- Préparation du réactif de Biuret.
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